通用PCR試劑盒無需常規(guī)核酸提取即可進(jìn)行檢測(cè)
點(diǎn)擊次數(shù)：761 更新時(shí)間：2021-04-14
通用PCR試劑盒指的是在PCR進(jìn)行的同時(shí)，對(duì)其過程進(jìn)行監(jiān)測(cè)的能力（即實(shí)時(shí)）。因此，數(shù)據(jù)可在PCR擴(kuò)增過程中，而非PCR結(jié)束之后，進(jìn)行收集。這為基于PCR的DNA和RNA定量方法帶來了變革。
在實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，反應(yīng)以循環(huán)中檢測(cè)到目標(biāo)擴(kuò)增的時(shí)間點(diǎn)為特征，而非在一定循環(huán)數(shù)后目標(biāo)分子素計(jì)的擴(kuò)增量。目標(biāo)核酸的起始拷貝數(shù)越高，則會(huì)越快觀察到熒光的顯著增加。相反，終點(diǎn)法檢測(cè)（也稱“讀板檢測(cè)”）測(cè)量的是PCR循環(huán)結(jié)束時(shí)素計(jì)的PCR產(chǎn)物量。
通用PCR試劑盒無需常規(guī)核酸提取，僅需對(duì)樣品進(jìn)行簡(jiǎn)單研磨、離心處理，即可開始后續(xù)核酸檢測(cè)。在保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的前提下，簡(jiǎn)化了檢測(cè)步驟，將檢測(cè)時(shí)間縮短至不到1小時(shí)，成為適合于屠宰場(chǎng)、養(yǎng)殖場(chǎng)的技術(shù)。
通用PCR試劑盒“變性-退火-延伸”三個(gè)步驟的實(shí)現(xiàn)方法是：
1、變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；
2、退火：退火也叫復(fù)性，模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，在這個(gè)溫度下，模板DNA單鏈能夠與引物的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；所謂引物，是一段已經(jīng)確定好的DNA的片段，通過引物找到模板DNA的相應(yīng)位置，也就是確定了復(fù)制的起點(diǎn)；
3、延伸：DNA模板-引物結(jié)合物在72℃、DNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則和半保留復(fù)制原理，就能合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的復(fù)制鏈。
希望上述內(nèi)容能夠幫助大家更好的了解本試劑盒。
